离子通道筛选模型开发

离子通道是一类重要的药物作用靶标,由于技术上的挑战,如很难构建稳定的高表达目标通道的细胞株以及筛选模型的灵敏度较低等问题,以前在筛选模型开发中涉及不多。

HEK / TRPV3
辉源生物用我们的知识和技术克服了这一障碍,开发出了多个具有良好信号窗口和稳定性的检测模型。HDB能提供从离子通道检测模型开发、筛选、活性化合物再确认、特异性分析到电生理检测的全套服务。
钙流检测
膜电位检测

电压依赖性钙通道

用对膜电位敏感的荧光染料
电生理检测

辉源配有多套完备的手动膜片钳系统。

在哺乳动物表达系统上,全细胞膜片钳记录能检测药物化合物对电压门控通道hERG的的毒副作用。为了增加膜片钳分析的通量,辉源公司采用了DADVC-8PP(压力真空管系统)达到了药物化合物灌流的快速转换。该应用系统的运用由膜片钳设置程序实现控制。

基于手动膜片钳的hERG安全性评价服务

hERG(人类ether-a-go-go-related基因)基因编码心肌细胞上钾通道的α亚单位。在心室肌细胞上, 快激活延迟整流性性钾电流对动作电位的复极化时程有着重要作用。hERG通道的基因突变能导致QT延长综合征,由于诱发尖端扭转型室性心动过速(Torsades de pointes,TdP)从而进一步增加了患者的突然死亡的危险系数。特别是,QT延长综合症患者除了心电图上显示的QT间隔延长以外,不表现有其他的临床症状。并且除了部分患者会有偶发性晕厥外,患者都比较健康。

Ikr在检测心肌细胞动作电位(AP)的电复极时起到重要的作用。HERG通道的基因突变可以导致长QT综合征(LQTS)。这种疾病患者有相当大的突然死亡风险,由于一种已知的尖端扭转型(TDP)心律失常。通常情况下,长QT综合征患者没有临床体征的心电图上QT间期延长,而患者表现得很健康,有些病人会出现的形式偶尔晕厥,并没有其他症状。

药物对hERG通道作用的检测是药物研发的一个不可欠缺的环节,约25%-40%的先导化合物可以不同程度地阻断hERG通道的开放。辉源公司将为客户在早期的新药研发和临床前期开发过程提供hERG的安全性检测。

HEK293-hERG细胞系由本公司自行建立,现已被应用于电生理及相关的试验项目。

图1,在整个实验记录中,高振幅的hERG尾电流-自然减少(rundown)小于20%
图2, 奎尼丁(C20H24N3O2) (literature IC50: 300-1000 nM)对hERG电流的影响
(A) 尾电流刺激波形:从-80 mV的钳制电压增至+40 mV,刺激波宽2000mS,再降低至-40 mV , 刺激波宽3000mS,可记录到HERG电流。每隔15S刺激一次.
(B)随着奎尼丁浓度的增大(从30nM到10000nM ),hERG电流逐渐减小;
(C)图显示奎尼丁抑制hERG电流的电流时间关系。每个点表示图A刺激波形记录下的最大尾电流幅值。
(D)实验数据根据Hill方程进行拟合。
 Reference compound  Literature IC50 (nM)  HD Bio IC50 (nM)
Cisapride
  2-45  2.8
Quinidine
  300-1000  472
Astemizole
  1-26  1.2
Dofetilide
  12-60  12.5
E-4031
  8-18  8
Verapamil
  140-800  721
P2X2检测
人源配体门控离子通道P2X2,属于嘌呤能受体家族中P2X家族。具有作为配体门控离子通道的功能,结合ATP并介导神经元和平滑肌细胞之间的突触传递。
HEK293-P2X2细胞系由辉源公司自主生产。
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